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ELISA是一種敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)方法，其具有試劑穩(wěn)定、易保存、操作簡(jiǎn)便、結(jié)果判斷較客觀等特點(diǎn)，但是在操作過(guò)程中還是需要注意下列問(wèn)題：
1、切記在加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
2、合理安排檢測(cè)量，以免反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。
3、在吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。
4、務(wù)必做雙孔實(shí)驗(yàn)，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，又能反映出試劑盒的精密度。
5、樣品稀釋液應(yīng)用加液器加注，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。
6、為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。
7、未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請(qǐng)于2-8℃ 保存。辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗人IgG 工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用。請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗人IgG 工作液。
8、ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中，加樣后及時(shí)放人孵箱，標(biāo)本較多時(shí)，要分批操作。按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間，防止孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。
9、剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理 30 分鐘后廢棄。
10、人ELISA試劑盒洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
11、每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是后加底物溶液2N H2SO4。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零。
12、手工洗板時(shí)每次加入洗滌液后，應(yīng)靜置 15～30s，不要將一個(gè)酶標(biāo)孔中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。
13、對(duì)樣本的結(jié)果有疑問(wèn)時(shí)需要使用其他檢測(cè)方法進(jìn)行驗(yàn)證。
14、沒(méi)有去離子水或雙蒸水時(shí)，可以使用娃哈哈純凈水等配制溶液，切勿使用自來(lái)水。
15、在使用微量加樣器時(shí)，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，及時(shí)吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
16、吸取液體時(shí)速度不易太快，以免產(chǎn)生氣泡。
為了得到準(zhǔn)確有效的結(jié)果，大家在實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中一定要注意這些問(wèn)題。
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